Микологическое исследование


Микологическое (культуральное) исследование направлено на выделение чистой культуры гриба и ее идентификацию. Посевы производят на плотные и жидкие, неселективные и селективные питательные среды: Сабуро, сусло-агар, Чапека, кукурузный, рисовый, картофельный агар, Френсиса, Полаччи и др.
Грибы хорошо растут также на некоторых средах для бактерий — кровяном, шоколадном, сердечно-мозговом агаре, угольно-дрожжевой среде. Их, как и картофельный агар с глюкозой, используют для выделения грибов из «стерильных» материалов (крови, ликвора, биоптатов и т.п.) и инкубирование ведут более длительное время. Для приготовления селективных сред к неселективным добавляют антибиотики (левомицетин — 20—50, стрептомицин — 40, пенициллин — 20 мкг/мл и др.), а также красители (бенгальский розовый и др.) или дезинфектанты. Так, для выделения грибов из контаминированных бактериями материалов используют агар Са- буро с глюкозой, в который добавляют пенициллин и гентами- цин или гентамицин и хлорамфеникол.
Для первичной дифференциации грибов за рубежом широко используют хромогенный агар CHROM. В его составе имеются хромогенные субстраты, которые при действии на них того или иного фермента грибов расщепляются с образованием окрашенных соединений. В результате этого колонии различных грибов на агаре CHROMотличаются по цвету: белые, кремовые, желтые, коричневые, черные, розовые, красные и т.д.
Среды для культивирования дерматофитов и других грибов. Агар Сабу- ро(г/л): мальтозы (глюкозы) — 40, пептона — 10, агар-агара — 15—18. Стерилизация при 110— 112°С при 0,5 атм в течение 15 мин, pH после стерилизации 5,6—6,8. Для придания селективных свойств в среду вводят хлорамфеникол (50 мкг/мл) или другие антимикробные средства. Применяют для первичного посева исследуемого материала.
Бульон Сабуро(не содержит агар-агара). Применяется для выращива-ния грибов при изготовлении антигенных препаратов.
Сусло-агар. К 100 мл пивного сусла (с 7 —8 % углеводов по Баллингу) добавляют 15— 18 г агар-агара. Стерилизация при 110— 112 °С в течение 10 мин, pH после стерилизации 6,5 —7,0. Применяют, как и агар Сабуро, для первичного посева исследуемого материала.
Агар для дерматофитов, DTM agar(г/л): глюкозы — 10, пептона — 10, фенолового красного — 0,2, агар-агара — 20. Стерилизация при 121 °С (1 атм) в течение 15 мин, pH после стерилизации 5,3 —5,7. Для придания селективных свойств в среду вводят: циклогексимид (0,05 %) для подав-ления роста большинства сапрофитных грибов, хлортетрациклин и ген-тамицин (по 50 мкг/мл) для подавления роста грамположительных и грамотрицательных бактерий, включая синегнойную палочку. Применя-ют для первичного посева исследуемого материала.
Среды для выращивания плесневых и дрожжевых грибов. Агар Чапека—Докса(г/л): сахарозы — 30, натрия нитрата — 3, калия гидрофосфата — 1, магния сульфата — 0,5, калия хлорида — 0,5, железа сульфата — 0,01, агар-агара — 15. Стерилизация при 112—120 °С в течение 15 мин, pH после стерилизации 7,1—7,4. Эта синтетическая среда применяется для культивирования грибов, изучения хламидоспор у грибов Candidaи морфологии аспергилл.
Дифференциальные среды.
Кукурузный агар(г/л): кукурузной муки — 43, глюкозы — 20, агар-агара — 15. Стерилизация при температуре 110 — 112 °С в течение 15 мин. Применяется для выявления красного пигмента у Trichophyton rubrumи хламидоспор у Candida albicans.
Среда Городковой(г/л): мясной воды — 10 мл, пептона — 10, натрия хлорида — 5, глюкозы — 2,5, агар-агара — 15. Стерилизация при ПО- 112 °С в течение 30 мин. Применяют для выявления аскоспор у дрожжей.
Рисовая среда(г/л): риса очищенного — 20, маннита — 20, L-сери- на — 10, натрия сульфата — 5, агар-агара — 20. Стерилизация при 110 — 112 °С в течение 20 мин, pH после стерилизации 6,8. Используется для выявления хламидоспор у дрожжеподобных организмов.
Рисовый отвар по Блинову.20 г очищенного риса кипятят в 1 л дистил-лированной воды в течение 30 мин, пропускают через бумажный фильтр и доводят фильтрат до 1000 мл дистиллированной водой, добавляют 20 г маннита, 10 г серина, 5 г натрия сульфата, 20 г агар-агара. Готовую среду осветляют лошадиной сывороткой (70 мл на 1000 мл среды). Стерилизуют при 110 — 112 °С в течение 20 мин.
Картофельный агар.20 г тертого картофеля настаивают в 1 л водопроводной воды в течение 4 ч при комнатной температуре, добавляют 20 г агар-агара, кипятят 10—15 мин, фильтруют, разливают в пробирки по 4 — 5 мл и стерилизуют при 120 °С в течение 30 мин.
Картофельный агар с глюкозойотличается тем, что берут 100 г протертого картофеля и после фильтрования среды добавляют 10 г глюкозы. Стерилизуют, как среду Сабуро.
Солодово-дрожжевой агар с глюкозой(г/л): пептона — 5, дрожжевого экстракта — 3, экстракта солода — 3, глюкозы — 10, агар-агара — 20. Стерилизуют при 120 °С 15 мин, pH после стерилизации 6,2. Для придания селективных свойств после стерилизации среды доводят pH до 4 или добавляют антибиотики.
Культивирование грибов осуществляют, как правило, при 22 — 28 °С в течение 2 — 4 нед. Если грибы оказываются в смешанных культурах, их чистые культуры получают после рассевов до изолированных колоний на кровяном агаре или после обработки соляной кислотой (для уничтожения бактерий). В последнем случае культуру гриба засевают в 3 пробирки с 5 мл бульона Сабуро с глюкозой, в которые добавляют 4, 2 и 1 каплю 1 N раствора НС1 соответственно. Через 24 —48 ч инкубирования при 25 °С по ОД мл бульона рассевают на агаре Сабуро с глюкозой.
Выделенные культуры гриба идентифицируют по внешнему виду и форме колоний, их консистенции, цвету, способности к росту при 37 °С, микроскопическому строению — характеру ветвления мицелия и наличию в нем септ, расположению конидиеносцев, спор, а также биохимическим и другим признакам. Размеры грибов определяют с помощью окуляра-микрометра. У некоторых грибов изучают способность ферментировать и ассимилировать органические вещества. Для изучения развития мицелия в динамике используют метод микрокультур.
<< | >>
Источник: Воробьёв А. А.. Медицинская и санитарная микробиология: Учеб. пособие для студ. высш. мед. учеб. заведений — М.: Издательский центр «Академия»,2003. — 464 с.. 2003

Еще по теме Микологическое исследование:

  1. ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ И ДРУГИЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
  2. Разработка исследований на основе других исследований
  3. МЕТОДЫ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
  4. ГЛАВА 3 ПРИНЦИПЫ ПОСТРОЕНИЯ ПАТОПСИХОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ. МЕТОДЫ ПАТОПСИХОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
  5. Колин Кэмпбелл, Томас Кэмпбелл. Китайское исследование. Результаты самого масштабного исследования связи питания и здоровья 2004, 2004
  6. Глава 3 МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ БОЛЬНЫХ С АРИТМИЯМИ И БЛОКАДАМИ СЕРДЦА РАССПРОС БОЛЬНОГО И ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
  7. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЛОТК
  8. ИССЛЕДОВАНИЕ
  9. Клинические исследования амисульприда
  10. Стратегиипсихологического исследования
  11. ИССЛЕДОВАНИЕ
  12. ЦИТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ